Sanger試劑是指DNFB。在弱堿性溶液中,氨基酸的α-氨基很容易與2,4-二硝基氟苯作用,生成穩(wěn)定的黃色2,4-二硝基苯氨基酸。該反應(yīng)由F. Sanger首先發(fā)現(xiàn),所以此反應(yīng)又稱桑格反應(yīng)(Sanger reaction),2,4-二硝基氟苯被稱為Sanger試劑。
Sanger試劑是指DNFB。
在弱堿性溶液中,氨基酸的α-氨基很容易與2,4-二硝基氟苯作用,生成穩(wěn)定的黃色2,4-二硝基苯氨基酸。該反應(yīng)由F. Sanger首先發(fā)現(xiàn),所以此反應(yīng)又稱桑格反應(yīng)(Sanger reaction),2,4-二硝基氟苯被稱為Sanger試劑。
由于硝基苯與氨基結(jié)合牢固,不易被水解,因此當(dāng)DNP-多肽被酸水解時(shí),所有肽鍵均被水解,只有N-末端氨基酸仍連在DNP上,所以產(chǎn)物為黃色的DNP-氨基酸和其它氨基酸的混合液。
混合液中只有DNP-氨基酸溶于乙酸乙酯,所以可以用乙酸乙酯抽提并將抽提液進(jìn)行色譜分析,再以標(biāo)準(zhǔn)的DNP-氨基酸作為對(duì)照鑒定出此氨基酸的種類。因此2,4-二硝基氟苯法可用于鑒定多肽或蛋白質(zhì)的N-末端氨基酸。
在弱堿性(pH 8~9)、暗處、室溫或40℃條件下,氨基酸的α-氨基很容易與2,4-二硝基氟苯(縮寫為FDNB或DNFB)反應(yīng),生成黃色的2,4-二硝基苯氨基酸(dinitrophenyl amino acid,簡稱DNP-氨基酸)。
多肽或蛋白質(zhì)的N-末端氨基酸的α-氨基也能與FDNB反應(yīng),生成一種二硝基苯肽(DNP-肽)。由于硝基苯與氨基結(jié)合牢固,不易被水解,因此當(dāng)DNP-多肽被酸水解時(shí),所有肽鍵均被水解,只有N-末端氨基酸仍連在DNP上,所以產(chǎn)物為黃色的DNP-氨基酸和其它氨基酸的混合液。
混合液中只有DNP-氨基酸溶于乙酸乙酯,所以可以用乙酸乙酯抽提并將抽提液進(jìn)行色譜分析,再以標(biāo)準(zhǔn)的DNP-氨基酸作為對(duì)照鑒定出此氨基酸的種類。因此2,4-二硝基氟苯法可用于鑒定多肽或蛋白質(zhì)的N-末端氨基酸。
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