一、實習目的

實習是學生大學學習很重要的實踐環(huán)節(jié)。實習是每一個大學生的必修課，它不僅讓我們學到很多在課堂上根本就學不到的知識，還能使我們開闊視野，增長見識，為我們以后更好把所學的知識運用到實際工作中打下堅實的基礎。

這次有機會能夠到疾控中心實習，我感到很慶幸。雖然只有兩周的時間，但是在幾位老師的幫助下，我對于微生物基礎知識有了更加深層次的理解，增加了對微生物知識的感性認識，鍛煉和提高了獨立分析和解決實際問題的能力。與老師相處了兩周，老師很熱心和真誠，盡心盡力的將實驗操作的技能和要點傳授給我，為人很和善，包容我的錯誤，讓我有了很大的進步。

二、實習內容

第一天在老師的帶我們去單位了解一下環(huán)境和認識一下老師。到達后李老師負責我們這次實習的全過程，她將實習過程的注意事項和規(guī)章制度，并且了解各個實驗室里面的大型儀器。

老師告誡我們到實習單位后一定要跟帶領我們的老師的作息時間一致，不可以早退，不能偷懶，一定要把實驗室的衛(wèi)生搞好。我們即將進入社會，在如何與人相處，處理好人際交往進行鍛煉和提升，聽到老師的一席話，我受益匪淺，暗暗下決心，一定要好好的實習和學習，不給學校丟臉。

這次實習，由于老師們正在進行的前期實驗都已完成，所以我們在這段時間主要進行《食品安全國家標準----菌落總數測定》的培訓。

開始時自己就是跟在實習老師的后面打打下手，幫忙拿溶劑，洗瓶子，稱量等。在實習老師的指導帶領下，我對實驗室分析的內容慢慢的有了很深的了解，自己在一個多星期的學習下也能獨立完成一些簡單實驗。

主要實驗是菌落總數的檢驗，程序如下：

樣品的稀釋

固體和半固體樣品：稱取25 g樣品置盛有225 ml磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質杯內，8000 r/min～10000 r/min均質1 min～2 min，或放入盛有225 ml稀釋液的無菌均質袋中，用拍擊式均質器拍打1 min～2 min，制成1:10的樣品勻液。

液體樣品：以無菌吸管吸取25 ml樣品置盛有225 ml磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。

用1 ml無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1 ml，沿管壁緩慢注于盛有9 ml稀釋液的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支無菌吸管反復吹打使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。

按1.3操作程序，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1次1 ml無菌吸管或吸頭。

根據對樣品污染狀況的估計，選擇2個～3個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進行10倍遞增稀釋時，吸取1 ml樣品勻液于無菌平皿內，每個稀釋度做兩個平皿。同時，分別吸取1 ml空白稀釋液加入兩個無菌平皿內作空白對照。

及時將15 ml～20 ml冷卻至46 ℃的平板計數瓊脂培養(yǎng)基（可放置于46 ℃1 ℃恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉動平皿使其混合均勻。

培養(yǎng)

待瓊脂凝固后，將平板翻轉，36 ℃1 ℃培養(yǎng)48 h2 h。水產品30 ℃1 ℃培養(yǎng)72 h3 h。6.2.2 如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基（約4 ml），凝固后翻轉平板，按6.2.1條件進行培養(yǎng)。

菌落計數

可用肉眼觀察，必要時用放大鏡或菌落計數器，記錄稀釋倍數和相應的菌落數量。菌落計數以菌落形成單位（colony-forming units，cfu）表示。

選取菌落數在30 cfu～300 cfu之間、無蔓延菌落生長的平板計數菌落總數。低于30 cfu的平板記錄具體菌落數，大于300 cfu的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數應采用兩個平板的平均數。

其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘以2，代表一個平板菌落數。

當平板上出現菌落間無明顯界線的鏈狀生長時，則將每條單鏈作為一個菌落計數。

菌落總數的計算方法